Il existe deux principales sources de contamination en salle blanche : les particules et les micro-organismes. Ces contaminations peuvent être dues à des facteurs humains et environnementaux, ou à des activités liées au processus. Malgré tous les efforts déployés, des contaminants finissent toujours par pénétrer en salle blanche. Parmi les vecteurs de contamination les plus courants, on peut citer le corps humain (cellules, cheveux), les facteurs environnementaux tels que la poussière, la fumée, les brouillards ou les équipements (matériel de laboratoire, matériel de nettoyage), ainsi que des techniques d’essuyage et des méthodes de nettoyage inappropriées.
Le principal vecteur de contamination est l'être humain. Malgré le port de vêtements de protection et le respect des procédures opératoires les plus rigoureuses, le manque de formation du personnel représente la plus grande menace de contamination en salle blanche. Les employés qui ne respectent pas les consignes de sécurité constituent un facteur de risque majeur. Une simple erreur ou un oubli peut suffire à contaminer l'ensemble de la salle blanche. L'entreprise ne peut garantir la propreté de la salle blanche qu'en assurant une surveillance continue et une formation actualisée en permanence, avec un taux de contamination nul.
Les outils et les équipements constituent d'autres sources importantes de contamination. Un simple nettoyage sommaire d'un chariot ou d'une machine avant son entrée en salle blanche peut y introduire des micro-organismes. Souvent, les opérateurs ignorent que les équipements sur roues roulent sur des surfaces contaminées lorsqu'ils sont introduits en salle blanche. Les surfaces (sols, murs, équipements, etc.) font l'objet de contrôles réguliers de la charge microbienne à l'aide de boîtes de contact spécialement conçues, contenant des milieux de culture tels que la gélose trypticase soja (TSA) et la gélose Sabouraud dextrose (SDA). La TSA est un milieu de culture adapté aux bactéries, tandis que la SDA est conçue pour les moisissures et les levures. La TSA et la SDA sont généralement incubées à des températures différentes : la TSA est exposée à des températures comprises entre 30 et 35 °C, température optimale de croissance pour la plupart des bactéries ; la plage de 20 à 25 °C est optimale pour la plupart des espèces de moisissures et de levures.
Autrefois, la circulation de l'air était une cause fréquente de contamination, mais les systèmes de climatisation des salles blanches actuelles ont pratiquement éliminé la contamination de l'air. L'air des salles blanches est contrôlé et surveillé régulièrement (quotidiennement, hebdomadairement, trimestriellement) afin de mesurer le nombre de particules, le nombre de germes viables, la température et l'humidité. Des filtres HEPA sont utilisés pour contrôler la concentration de particules dans l'air et peuvent filtrer les particules jusqu'à 0,2 µm. Ces filtres fonctionnent généralement en continu à un débit calibré pour maintenir la qualité de l'air dans la salle. L'humidité est généralement maintenue à un faible niveau pour empêcher la prolifération de micro-organismes tels que les bactéries et les moisissures, qui se développent de préférence en milieu humide.
En réalité, la source de contamination la plus fréquente et de plus haut niveau en salle blanche est l'opérateur.
Les sources et les voies d'entrée de la contamination ne varient pas significativement d'un secteur industriel à l'autre, mais les seuils de contamination tolérables et intolérables diffèrent selon les secteurs. Par exemple, les fabricants de comprimés à avaler n'ont pas à respecter le même niveau de propreté que les fabricants de produits injectables, lesquels sont directement introduits dans le corps humain.
Les fabricants de produits pharmaceutiques tolèrent moins la contamination microbienne que les fabricants de produits électroniques de pointe. Les fabricants de semi-conducteurs, qui produisent des composants microscopiques, ne peuvent accepter aucune contamination particulaire afin de garantir le bon fonctionnement de leurs produits. Par conséquent, ces entreprises se préoccupent uniquement de la stérilité du produit destiné à être implanté dans le corps humain et du bon fonctionnement de la puce ou du téléphone portable. Elles sont relativement moins préoccupées par les moisissures, les champignons ou autres formes de contamination microbienne en salle blanche. En revanche, les entreprises pharmaceutiques prennent en compte toutes les sources de contamination, vivantes ou mortes.
L'industrie pharmaceutique est réglementée par la FDA et doit se conformer strictement aux Bonnes Pratiques de Fabrication (BPF), car les conséquences d'une contamination dans ce secteur sont extrêmement graves. Les fabricants de médicaments doivent non seulement garantir l'absence de bactéries dans leurs produits, mais aussi assurer une documentation et une traçabilité complètes. Une entreprise de haute technologie peut expédier un ordinateur portable ou un téléviseur dès lors que le produit réussit son audit interne. La situation est bien différente pour l'industrie pharmaceutique, d'où l'importance cruciale pour une entreprise de disposer de procédures d'exploitation de salles blanches, de les appliquer et de les documenter. Pour des raisons de coûts, de nombreuses entreprises font appel à des prestataires de nettoyage externes.
Un programme complet de contrôle environnemental des salles blanches doit inclure les particules en suspension visibles et invisibles. Bien qu'il ne soit pas obligatoire d'identifier tous les contaminants présents dans ces environnements contrôlés par des micro-organismes, le programme de contrôle environnemental doit prévoir une identification bactérienne appropriée des prélèvements. De nombreuses méthodes d'identification bactérienne sont actuellement disponibles.
La première étape de l'identification bactérienne, notamment en milieu stérile, est la coloration de Gram, car elle fournit des indications précieuses sur l'origine de la contamination microbienne. Si l'isolement et l'identification microbienne révèlent la présence de coques Gram positifs, la contamination peut être d'origine humaine. Si elle révèle la présence de bacilles Gram positifs, la contamination peut provenir de poussières ou de souches résistantes aux désinfectants. Si elle révèle la présence de bacilles Gram négatifs, la contamination peut provenir de l'eau ou d'une surface humide.
L'identification microbiologique en salle blanche pharmaceutique est essentielle car elle est liée à de nombreux aspects de l'assurance qualité, tels que les bioessais en milieu de production, l'identification bactérienne des produits finis, la détection de micro-organismes non identifiés dans les produits stériles et l'eau, le contrôle qualité des techniques de fermentation et de stockage en biotechnologie, et la vérification des analyses microbiologiques lors de la validation. La méthode de la FDA permettant de confirmer la survie des bactéries dans un environnement spécifique est de plus en plus répandue. Lorsque les niveaux de contamination microbienne dépassent les seuils spécifiés ou que les résultats des tests de stérilité indiquent une contamination, il est impératif de vérifier l'efficacité des agents de nettoyage et de désinfection et d'identifier et d'éliminer les sources de contamination.
Il existe deux méthodes pour surveiller les surfaces environnementales des salles blanches :
1. Plaques de contact
Ces boîtes de culture spéciales contiennent un milieu de croissance stérile, préparé de manière à dépasser légèrement le bord de la boîte. Le couvercle de contact recouvre la surface à échantillonner ; les micro-organismes visibles à la surface adhèrent à la gélose et s’y développent. Cette technique permet de quantifier les micro-organismes présents sur une surface.
2. Méthode d'écouvillonnage
Ce dispositif est stérile et conservé dans un liquide stérile approprié. L'écouvillon est appliqué sur la surface à tester et le micro-organisme est identifié par récupération de l'écouvillon dans le milieu de culture. Les écouvillons sont souvent utilisés sur des surfaces irrégulières ou dans des zones difficiles d'accès pour un prélèvement par contact. Le prélèvement par écouvillonnage est un test principalement qualitatif.
Date de publication : 21 octobre 2024