Il existe deux principales sources de contamination en salle blanche : les particules et les micro-organismes, qui peuvent être causés par des facteurs humains et environnementaux, ou par des activités connexes au cours du processus. Malgré tous les efforts, la contamination continuera de pénétrer dans la salle blanche. Les vecteurs de contamination les plus courants sont les corps humains (cellules, cheveux), les facteurs environnementaux tels que la poussière, la fumée, le brouillard ou les équipements (matériel de laboratoire, matériel de nettoyage), ainsi que des techniques d'essuyage et des méthodes de nettoyage inappropriées.
Le vecteur de contamination le plus courant est l'homme. Même avec des tenues et des procédures opérationnelles très strictes, les opérateurs mal formés constituent la principale menace de contamination en salle blanche. Les employés qui ne respectent pas les consignes de la salle blanche constituent un facteur de risque élevé. La moindre erreur ou omission d'un employé peut entraîner la contamination de toute la salle blanche. L'entreprise ne peut garantir la propreté de la salle blanche que par une surveillance continue et une mise à jour régulière des formations, avec un taux de contamination nul.
Les outils et équipements constituent d'autres sources importantes de contamination. Un chariot ou une machine essuyés grossièrement avant d'entrer en salle blanche peut introduire des micro-organismes. Souvent, les travailleurs ignorent que les équipements à roues roulent sur des surfaces contaminées lorsqu'ils sont introduits dans la salle blanche. Les surfaces (sols, murs, équipements, etc.) sont régulièrement testées pour déterminer leur viabilité à l'aide de boîtes de contact spécialement conçues contenant des milieux de croissance tels que la gélose trypticase soja (TSA) et la gélose dextrose Sabouraud (SDA). La TSA est un milieu de croissance conçu pour les bactéries, tandis que la SDA est un milieu de croissance conçu pour les moisissures et les levures. La TSA et la SDA sont généralement incubées à des températures différentes, la TSA étant exposée à des températures comprises entre 30 et 35 °C, température optimale pour la croissance de la plupart des bactéries. La plage de 20 à 25 °C est optimale pour la plupart des moisissures et des levures.
Le flux d'air était autrefois une cause fréquente de contamination, mais les systèmes CVC des salles blanches actuels ont pratiquement éliminé la contamination de l'air. L'air des salles blanches est contrôlé et surveillé régulièrement (par exemple, quotidiennement, hebdomadairement, trimestriellement) pour le nombre de particules, le nombre de germes viables, la température et l'humidité. Des filtres HEPA permettent de contrôler le nombre de particules dans l'air et peuvent filtrer les particules jusqu'à 0,2 µm. Ces filtres fonctionnent généralement en continu à un débit calibré pour maintenir la qualité de l'air dans la pièce. L'humidité est généralement maintenue à un faible niveau afin d'empêcher la prolifération de micro-organismes tels que les bactéries et les moisissures qui apprécient les environnements humides.
En fait, le niveau de contamination le plus élevé et la source la plus courante dans une salle blanche est l’opérateur.
Les sources et les voies d'entrée de la contamination ne varient pas significativement d'un secteur à l'autre, mais il existe des différences entre les secteurs en termes de niveaux de contamination tolérables et intolérables. Par exemple, les fabricants de comprimés ingérables n'ont pas besoin de maintenir le même niveau de propreté que les fabricants d'agents injectables directement injectés dans le corps humain.
Les fabricants de produits pharmaceutiques ont une tolérance à la contamination microbienne inférieure à celle des fabricants d'électronique de haute technologie. Les fabricants de semi-conducteurs qui produisent des produits microscopiques ne peuvent tolérer aucune contamination particulaire pour garantir la fonctionnalité du produit. Par conséquent, ces entreprises se préoccupent uniquement de la stérilité du produit à implanter dans le corps humain et de la fonctionnalité de la puce ou du téléphone portable. Elles sont relativement moins préoccupées par les moisissures, les champignons et autres formes de contamination microbienne en salle blanche. En revanche, les entreprises pharmaceutiques se préoccupent de toutes les sources de contamination, vivantes ou mortes.
L'industrie pharmaceutique est réglementée par la FDA et doit respecter scrupuleusement les Bonnes Pratiques de Fabrication (BPF), car les conséquences d'une contamination dans ce secteur sont très néfastes. Les fabricants de médicaments doivent non seulement garantir l'absence de bactéries dans leurs produits, mais aussi documenter et suivre l'ensemble de leurs opérations. Une entreprise d'équipements de haute technologie peut expédier un ordinateur portable ou un téléviseur à condition de réussir son audit interne. Mais ce n'est pas si simple pour l'industrie pharmaceutique ; c'est pourquoi il est crucial pour une entreprise de disposer, d'utiliser et de documenter des procédures opérationnelles en salle blanche. Pour des raisons de coût, de nombreuses entreprises font appel à des services de nettoyage professionnels externes.
Un programme complet d'analyses environnementales en salle blanche doit inclure les particules visibles et invisibles en suspension dans l'air. Bien qu'il ne soit pas obligatoire que tous les contaminants présents dans ces environnements contrôlés soient identifiés par des micro-organismes, le programme de contrôle environnemental doit inclure un niveau approprié d'identification bactérienne des échantillons extraits. De nombreuses méthodes d'identification bactérienne sont actuellement disponibles.
La première étape de l'identification bactérienne, notamment lors de l'isolement en salle blanche, est la coloration de Gram, car elle peut fournir des indices interprétatifs sur la source de la contamination microbienne. Si l'isolement et l'identification microbienne révèlent des cocci à Gram positif, la contamination pourrait provenir d'une source humaine. Si l'isolement et l'identification microbienne révèlent des bacilles à Gram positif, la contamination pourrait provenir de la poussière ou de souches résistantes aux désinfectants. Si l'isolement et l'identification microbienne révèlent des bacilles à Gram négatif, la source de contamination pourrait provenir de l'eau ou de toute surface humide.
L'identification microbienne en salle blanche pharmaceutique est essentielle car elle est liée à de nombreux aspects de l'assurance qualité, tels que les bio-essais en milieu de fabrication ; les tests d'identification bactérienne des produits finis ; la présence d'organismes non identifiés dans les produits et l'eau stériles ; le contrôle qualité des technologies de stockage par fermentation dans l'industrie biotechnologique ; et la vérification des tests microbiens lors de la validation. La méthode de la FDA pour confirmer la survie des bactéries dans un environnement spécifique deviendra de plus en plus courante. Lorsque les niveaux de contamination microbienne dépassent le seuil spécifié ou que les résultats des tests de stérilité indiquent une contamination, il est nécessaire de vérifier l'efficacité des agents de nettoyage et de désinfection et d'éliminer l'identification des sources de contamination.
Il existe deux méthodes pour surveiller les surfaces environnementales des salles blanches :
1. Plaques de contact
Ces boîtes de culture spéciales contiennent un milieu de culture stérile, préparé de manière à dépasser le bord de la boîte. Le couvercle de la boîte de contact recouvre la surface à échantillonner, et les micro-organismes visibles à la surface adhèrent à la surface de la gélose et incubent. Cette technique permet de déterminer le nombre de micro-organismes visibles sur une surface.
2. Méthode de l'écouvillonnage
Cet écouvillon est stérile et conservé dans un liquide stérile approprié. L'écouvillon est appliqué sur la surface à tester et le micro-organisme est identifié en le récupérant dans le milieu. Les écouvillons sont souvent utilisés sur des surfaces irrégulières ou dans des zones difficiles à échantillonner avec une boîte de Pétri. L'échantillonnage par écouvillon est davantage un test qualitatif.
Date de publication : 21 octobre 2024