1. Objectif : Cette procédure vise à fournir une procédure standardisée pour les opérations aseptiques et la protection des salles stériles.
2. Champ d'application : laboratoire d'essais biologiques
3. Personne responsable : Testeur superviseur CQ
4. Définition : Aucune
5. Précautions de sécurité
Effectuer strictement les opérations aseptiques pour éviter la contamination microbienne ; les opérateurs doivent éteindre la lampe UV avant d'entrer dans la salle stérile.
6. Procédures
6.1. La salle stérile doit être équipée d'une salle d'opération stérile et d'une salle tampon. La propreté de la salle d'opération stérile doit atteindre la classe 10000. La température intérieure doit être maintenue entre 20 et 24 °C et l'humidité entre 45 et 60 %. La propreté de la paillasse doit atteindre la classe 100.
6.2. La salle stérile doit être maintenue propre et il est strictement interdit d'empiler des débris pour éviter toute contamination.
6.3. Empêcher strictement la contamination de tout le matériel de stérilisation et des milieux de culture. Les personnes contaminées doivent cesser de les utiliser.
6.4. La salle stérile doit être équipée de désinfectants à concentration efficace, tels qu'une solution de crésol à 5 %, d'alcool à 70 %, d'une solution de chlorméthionine à 0,1 %, etc.
6.5. La salle stérile doit être régulièrement stérilisée et nettoyée avec un désinfectant approprié pour garantir que la propreté de la salle stérile répond aux exigences.
6.6. Tous les instruments, instruments, plats et autres articles qui doivent être apportés dans la salle stérile doivent être soigneusement emballés et stérilisés par des méthodes appropriées.
6.7. Avant d'entrer dans la salle stérile, le personnel doit se laver les mains au savon ou au désinfectant, puis enfiler des vêtements de travail, des chaussures, un bonnet, un masque et des gants spéciaux dans la salle tampon (ou s'essuyer à nouveau les mains avec de l'éthanol à 70 %). Les opérations doivent être effectuées dans une chambre bactérienne.
6.8. Avant d'utiliser la chambre stérile, la lampe ultraviolette doit être allumée pour l'irradiation et la stérilisation pendant plus de 30 minutes, et la paillasse doit être allumée simultanément pour le soufflage d'air. Une fois l'opération terminée, la chambre stérile doit être nettoyée à temps, puis stérilisée aux ultraviolets pendant 20 minutes.
6.9. Avant l'inspection, l'emballage extérieur de l'échantillon d'essai doit être conservé intact et ne doit pas être ouvert afin d'éviter toute contamination. Avant l'inspection, désinfecter la surface extérieure à l'aide de cotons imbibés d'alcool à 70 %.
6.10. Lors de chaque opération, un contrôle négatif doit être effectué pour vérifier la fiabilité de l'opération aseptique.
6.11. Pour absorber un liquide bactérien, utilisez une ventouse. Ne touchez pas la paille directement avec la bouche.
6.12. L'aiguille d'inoculation doit être stérilisée à la flamme avant et après chaque utilisation. Après refroidissement, la culture peut être inoculée.
6.13. Les pailles, tubes à essai, boîtes de Petri et autres ustensiles contenant du liquide bactérien doivent être trempés dans un seau de stérilisation contenant une solution Lysol à 5 % pour la désinfection, puis retirés et rincés après 24 heures.
6.14. En cas de déversement de liquide bactérien sur une table ou au sol, verser immédiatement une solution d'acide phénique à 5 % ou de Lysol à 3 % sur la zone contaminée pendant au moins 30 minutes avant de la traiter. En cas de contamination bactérienne, les vêtements et les casques de travail doivent être retirés immédiatement et lavés après stérilisation à la vapeur haute pression.
6.15. Tout objet contenant des bactéries vivantes doit être désinfecté avant d'être rincé sous le robinet. Il est strictement interdit de polluer les égouts.
6.16. Le nombre de colonies en chambre stérile doit être vérifié mensuellement. La paillasse ouverte, prendre des boîtes de Pétri stériles de 90 mm de diamètre intérieur et injecter aseptiquement environ 15 ml de milieu de culture gélosé nutritif fondu et refroidi à environ 45 °C. Après solidification, placer la boîte à l'envers à 30-35 °C. Incuber pendant 48 heures dans un incubateur. Après vérification de la stérilité, prendre 3 à 5 boîtes et les placer à gauche, au milieu et à droite de la position de travail. Après ouverture du couvercle et exposition pendant 30 minutes, les placer à l'envers dans un incubateur à 30-35 °C pendant 48 heures et les sortir. Le nombre moyen de bactéries diverses sur la boîte dans une zone propre de classe 100 ne doit pas dépasser 1 colonie, et le nombre moyen dans une salle propre de classe 10 000 ne doit pas dépasser 3 colonies. Si la limite est dépassée, la salle stérile doit être soigneusement désinfectée jusqu'à ce que des inspections répétées répondent aux exigences.
7. Reportez-vous au chapitre (Méthode d'inspection de la stérilité) dans « Méthodes d'inspection hygiénique des médicaments » et « Pratiques opérationnelles standard chinoises pour l'inspection des médicaments ».
8. Département Distribution : Département Gestion de la Qualité
Conseils techniques pour les salles blanches :
Après avoir obtenu un environnement et des matériaux stériles, il est nécessaire de maintenir un état stérile afin d'étudier un micro-organisme connu spécifique ou d'exploiter ses fonctions. Sinon, divers micro-organismes extérieurs peuvent facilement s'y mélanger. Ce phénomène de mélange de micro-organismes extérieurs non pertinents est appelé « bactéries contaminantes » en microbiologie. La prévention de la contamination est une technique essentielle en microbiologie. La stérilisation complète, d'une part, et la prévention de la contamination, d'autre part, sont deux aspects de la technique aseptique. De plus, il est essentiel d'empêcher les micro-organismes étudiés, en particulier les micro-organismes pathogènes ou génétiquement modifiés inexistants dans la nature, de s'échapper de nos récipients expérimentaux vers l'environnement extérieur. À cette fin, de nombreuses mesures sont mises en œuvre en microbiologie.
Une chambre stérile est généralement une petite pièce spécialement aménagée dans un laboratoire de microbiologie. Elle peut être construite avec des plaques et du verre. Sa superficie ne doit pas être trop grande (environ 4 à 5 mètres carrés) et sa hauteur doit être d'environ 2,5 mètres. Une chambre tampon doit être installée à l'extérieur de la chambre stérile. Les portes de la chambre tampon et de la chambre stérile ne doivent pas être orientées dans la même direction afin d'empêcher le flux d'air d'introduire diverses bactéries. La chambre stérile et la chambre tampon doivent être étanches à l'air. L'équipement de ventilation intérieure doit être équipé de dispositifs de filtration d'air. Le sol et les murs de la chambre stérile doivent être lisses, peu salissants et faciles à nettoyer. Le plan de travail doit être plan. Les chambres stériles et la chambre tampon sont équipées de lampes ultraviolettes. Ces lampes sont placées à 1 mètre du plan de travail. Le personnel entrant dans la chambre stérile doit porter des vêtements et des masques stérilisés.
Actuellement, les salles stériles sont principalement utilisées dans les usines de microbiologie, tandis que les laboratoires généraux utilisent des paillasses stériles. La fonction principale de ces paillasses est d'utiliser un dispositif à flux d'air laminaire pour éliminer les poussières fines, notamment les micro-organismes, présentes sur la surface de travail. Ce dispositif électrique permet à l'air de traverser un filtre HEPA avant de pénétrer sur la surface de travail, assurant ainsi un flux d'air stérile constant. De plus, un rideau d'air à grande vitesse est installé sur le côté extérieur pour empêcher toute pénétration d'air bactérien.
Dans les environnements difficiles, des boîtes stériles en bois peuvent également remplacer les paillasses. De structure simple, elles sont faciles à déplacer. Deux ouvertures à l'avant sont obturées par des portes à pousser-tirer lorsqu'elles ne sont pas utilisées. Vous pouvez y étendre vos bras pendant l'utilisation. La partie supérieure de la façade est vitrée pour faciliter l'utilisation interne. Une lampe ultraviolette est intégrée à l'intérieur, et les ustensiles et les bactéries peuvent être introduits par une petite porte latérale.
Les techniques opératoires aseptiques jouent aujourd'hui un rôle essentiel non seulement dans la recherche et les applications microbiologiques, mais sont également largement utilisées dans de nombreuses biotechnologies, comme la technologie transgénique, la technologie des anticorps monoclonaux, etc.
Date de publication : 06/03/2024