1. Objectif: Cette procédure vise à fournir une procédure standardisée pour les opérations aseptiques et la protection des salles stériles.
2. Portée de l'application: Laboratoire de tests biologiques
3. Personne responsable: Testeur de superviseur QC
4.Définition: aucun
5. Précautions de sécurité
Effectuer strictement les opérations aseptiques pour prévenir la contamination microbienne; Les opérateurs doivent désactiver la lampe UV avant d'entrer dans une salle stérile.
6. procédures
6.1. La salle stérile doit être équipée d'une salle d'opération stérile et d'une salle tampon. La propreté de la salle d'opération stérile doit atteindre la classe 10000. La température intérieure doit être maintenue à 20-24 ° C et l'humidité doit être maintenue à 45-60%. La propreté du banc propre devrait atteindre la classe 100.
6.2. La pièce stérile doit être maintenue propre et il est strictement interdit d'empiler les débris pour éviter la contamination.
6.3. Empêcher strictement la contamination de tous les équipements de stérilisation et des milieux de culture. Ceux qui sont contaminés devraient cesser de les utiliser.
6.4. La salle stérile doit être équipée de désinfectants de concentration de travail, tels que 5% de solution de Cresol, 70% d'alcool, 0,1% de solution de chlorméthionine, etc.
6.5. La salle stérile doit être régulièrement stérilisée et nettoyée avec un désinfectant approprié pour s'assurer que la propreté de la salle stérile répond aux exigences.
6.6. Tous les instruments, instruments, plats et autres articles qui doivent être amenés dans une pièce stérile doivent être étroitement enveloppés et stérilisés par des méthodes appropriées.
6.7. Avant d'entrer dans une pièce stérile, le personnel doit se laver les mains avec du savon ou du désinfectant, puis se transformer en vêtements de travail spéciaux, chaussures, chapeaux, masques et gants dans une salle tampon (ou essuyer à nouveau les mains avec de l'éthanol à 70%) avant d'entrer dans une pièce stérile. Effectuer des opérations dans la chambre bactérienne.
6.8. Avant d'utiliser une pièce stérile, la lampe ultraviolette dans une pièce stérile doit être activée pour l'irradiation et la stérilisation pendant plus de 30 minutes, et le banc propre doit être allumé pour un soufflage d'air en même temps. Une fois l'opération terminée, la salle stérile doit être nettoyée à temps puis stérilisé par une lumière ultraviolette pendant 20 minutes.
6.9. Avant l'inspection, l'emballage extérieur de l'échantillon de test doit être maintenu intact et ne doit pas être ouvert pour éviter la contamination. Avant l'inspection, utilisez à 70% des boules de coton d'alcool pour désinfecter la surface extérieure.
6.10. Au cours de chaque opération, un contrôle négatif doit être effectué pour vérifier la fiabilité du fonctionnement aseptique.
6.11. Lorsque vous absorbez le liquide bactérien, vous devez utiliser une boule d'aspiration pour l'absorber. Ne touchez pas la paille directement avec votre bouche.
6.12. L'aiguille d'inoculation doit être stérilisée par la flamme avant et après chaque utilisation. Après refroidissement, la culture peut être inoculée.
6.13. Les pailles, les tubes à essai, les boîtes de Pétri et autres ustensiles contenant du liquide bactérien doivent être trempés dans un seau de stérilisation contenant 5% de lysol pour la désinfection, et retiré et rincé après 24 heures.
6.14. S'il y a du liquide bactérien renversé sur la table ou le sol, vous devez immédiatement verser une solution d'acide carbolique à 5% ou à 3% de lysol sur la zone contaminée pendant au moins 30 minutes avant de la traiter. Lorsque les vêtements de travail et les chapeaux sont contaminés par du liquide bactérien, ils doivent être enlevés immédiatement et lavés après stérilisation à la vapeur à haute pression.
6.15. Tous les éléments contenant des bactéries vivantes doivent être désinfectés avant d'être rincés sous le robinet. Il est strictement interdit de polluer l'égout.
6.16. Le nombre de colonies dans une salle stérile doit être vérifié mensuellement. Avec le banc propre ouvert, prenez un certain nombre de boîtes de Pétri stériles avec un diamètre intérieur de 90 mm et injectez aseptiquement environ 15 ml de milieu de culture de gélose nutritive qui a été fondu et refroidi à environ 45 ° C. Après la solidification, placez-le à la hausse à 30 à 35 incuber pendant 48 heures dans un incubateur. Après avoir prouvé la stérilité, prenez 3 à 5 assiettes et placez-les à gauche, au milieu et à droite de la position de travail. Après avoir ouvert la couverture et les exposer pendant 30 minutes, placez-les à l'envers dans un incubateur de 30 à 35 ° C pendant 48 heures et retirez-les. examiner. Le nombre moyen de bactéries diverses sur l'assiette dans une zone propre de classe 100 ne doit pas dépasser 1 colonie, et le nombre moyen dans une salle blanche de classe 10000 ne doit pas dépasser 3 colonies. Si la limite est dépassée, la salle stérile doit être soigneusement désinfectée jusqu'à ce que les inspections répétées répondent aux exigences.
7. Reportez-vous au chapitre (méthode d'inspection des stérilité) dans "Méthodes d'inspection hygiénique des médicaments" et "Pratiques opérationnelles standard de Chine pour l'inspection des médicaments".
8. DÉPARTEMENT DE DISTRIBUTION: Département de gestion de la qualité
Conseils techniques de la salle propre:
After obtaining a sterile environment and sterile materials, we must maintain a sterile state in order to study a specific known microorganism or utilize their functions. Sinon, divers micro-organismes de l'extérieur peuvent facilement se mélanger. Le phénomène du mélange de micro-organismes non pertinents de l'extérieur est appelé les bactéries contaminantes en microbiologie. La prévention de la contamination est une technique critique dans les travaux microbiologiques. La stérilisation complète d'une part et la prévention de la contamination des autres sont deux aspects de la technique aseptique. De plus, nous devons empêcher les micro-organismes à l'étude, en particulier les micro-organismes pathogènes ou les micro-organismes génétiquement modifiés qui n'existent pas dans la nature, de s'échapper de nos conteneurs expérimentaux dans un environnement extérieur. À ces fins, en microbiologie, il existe de nombreuses mesures.
La salle stérile est généralement une petite pièce spécialement installée dans le laboratoire de microbiologie. Peut être construit avec des draps et du verre. La zone ne doit pas être trop grande, environ 4 à 5 mètres carrés et la hauteur doit être d'environ 2,5 mètres. Une salle tampon doit être installée à l'extérieur de la salle stérile. La porte de la salle tampon et la porte de la pièce stérile ne doivent pas faire face à la même direction pour empêcher le flux d'air de proposer des bactéries diverses. La chambre stérile et la salle tampon doivent être hermétiques. L'équipement de ventilation intérieure doit avoir des dispositifs de filtration de l'air. Le sol et les murs de la pièce stérile doivent être lisses, difficiles à abriter de la saleté et faciles à nettoyer. La surface de travail doit être niveau. La chambre stérile et la salle tampon sont équipées de lumières ultraviolets. Les lumières ultraviolets dans une salle stérile sont à 1 mètre de la surface de travail. Le personnel entrant dans une pièce stérile doit porter des vêtements et des chapeaux stérilisés.
Actuellement, les chambres stériles existent principalement dans les usines de microbiologie, tandis que les laboratoires généraux utilisent un banc propre. La fonction principale du banc propre est d'utiliser le dispositif d'écoulement de l'air laminaire pour éliminer diverses minuscules poussières, y compris les micro-organismes sur la surface de travail. Le dispositif électrique permet à l'air de passer par le filtre HEPA puis de pénétrer dans la surface de travail, afin que la surface de travail soit toujours maintenue sous le contrôle de l'air stérile qui coule. De plus, il y a un rideau d'air à grande vitesse sur le côté près de l'extérieur pour empêcher l'air bactérien externe d'entrer.
Dans des endroits avec des conditions difficiles, des boîtes stériles en bois peuvent également être utilisées au lieu d'un banc propre. La boîte stérile a une structure simple et est facile à déplacer. Il y a deux trous à l'avant de la boîte, qui sont bloqués par des portes push-pull lorsqu'ils ne fonctionnent pas. Vous pouvez étendre vos bras pendant l'opération. La partie supérieure de l'avant est équipée de verre pour faciliter le fonctionnement interne. Il y a une lampe ultraviolette à l'intérieur de la boîte, et les ustensiles et les bactéries peuvent être placés par petite porte sur le côté.
Les techniques de fonctionnement aseptique jouent actuellement non seulement un rôle central dans la recherche et les applications microbiologiques, mais sont également largement utilisés dans de nombreuses biotechnologies. Par exemple, la technologie transgénique, la technologie des anticorps monoclonaux, etc.
Heure du poste: MAR-06-2024