1. Objet : Cette procédure vise à fournir une procédure standardisée pour les opérations aseptiques et la protection des salles stériles.
2. Champ d'application : laboratoire d'essais biologiques
3. Personne responsable : Testeur de superviseur QC
4.Définition : Aucune
5. Précautions de sécurité
Effectuer strictement des opérations aseptiques pour prévenir la contamination microbienne ;les opérateurs doivent éteindre la lampe UV avant d’entrer dans la pièce stérile.
6.Procédures
6.1.La salle stérile doit être équipée d’une salle d’opération stérile et d’une salle tampon.La propreté de la salle d'opération stérile doit atteindre la classe 10 000. La température intérieure doit être maintenue entre 20 et 24 °C et l'humidité doit être maintenue entre 45 et 60 %.La propreté du banc propre doit atteindre la classe 100.
6.2.La salle stérile doit être maintenue propre et il est strictement interdit d’entasser des débris pour éviter toute contamination.
6.3.Empêcher strictement la contamination de tous les équipements de stérilisation et des milieux de culture.Ceux qui sont contaminés devraient cesser de les utiliser.
6.4.La salle stérile doit être équipée de désinfectants à concentration de travail, tels qu'une solution de crésol à 5 %, d'alcool à 70 %, une solution de chlorméthionine à 0,1 %, etc.
6.5.La salle stérile doit être régulièrement stérilisée et nettoyée avec un désinfectant approprié pour garantir que la propreté de la salle stérile répond aux exigences.
6.6.Tous les instruments, instruments, plats et autres objets qui doivent être apportés dans une pièce stérile doivent être étroitement emballés et stérilisés par des méthodes appropriées.
6.7.Avant d'entrer dans la salle stérile, le personnel doit se laver les mains avec du savon ou un désinfectant, puis enfiler des vêtements de travail spéciaux, des chaussures, des chapeaux, des masques et des gants dans la salle tampon (ou s'essuyer à nouveau les mains avec de l'éthanol à 70 %) avant d'entrer dans la salle stérile.Effectuer des opérations en chambre bactérienne.
6.8.Avant d'utiliser une pièce stérile, la lampe ultraviolette de la pièce stérile doit être allumée pour l'irradiation et la stérilisation pendant plus de 30 minutes, et le banc propre doit être allumé pour souffler de l'air en même temps.Une fois l'opération terminée, la pièce stérile doit être nettoyée à temps puis stérilisée à la lumière ultraviolette pendant 20 minutes.
6.9.Avant l'inspection, l'emballage extérieur de l'échantillon d'essai doit être conservé intact et ne doit pas être ouvert pour éviter toute contamination.Avant l'inspection, utilisez des boules de coton alcoolisées à 70 % pour désinfecter la surface extérieure.
6.10.Lors de chaque opération, un contrôle négatif doit être effectué pour vérifier la fiabilité du fonctionnement aseptique.
6.11.Lors de l'absorption d'un liquide bactérien, vous devez utiliser une boule d'aspiration pour l'absorber.Ne touchez pas la paille directement avec votre bouche.
6.12.L'aiguille d'inoculation doit être stérilisée à la flamme avant et après chaque utilisation.Après refroidissement, la culture peut être inoculée.
6.13.Les pailles, tubes à essai, boîtes de Pétri et autres ustensiles contenant du liquide bactérien doivent être trempés dans un seau de stérilisation contenant une solution Lysol à 5 % pour la désinfection, puis retirés et rincés après 24 heures.
6.14.Si du liquide bactérien est renversé sur la table ou le sol, vous devez immédiatement verser une solution d'acide carbolique à 5 % ou du Lysol à 3 % sur la zone contaminée pendant au moins 30 minutes avant de la traiter.Lorsque les vêtements de travail et les chapeaux sont contaminés par du liquide bactérien, ils doivent être immédiatement retirés et lavés après stérilisation à la vapeur haute pression.
6.15.Tous les articles contenant des bactéries vivantes doivent être désinfectés avant d'être rincés sous le robinet.Il est strictement interdit de polluer les égouts.
6.16.Le nombre de colonies en salle stérile doit être vérifié mensuellement.Avec la paillasse propre ouverte, prenez un certain nombre de boîtes de Pétri stériles d'un diamètre intérieur de 90 mm et injectez de manière aseptique environ 15 ml de milieu de culture gélose nutritive qui a été fondu et refroidi à environ 45°C.Après solidification, placez-le à l'envers à 30 à 35. Incubez 48 heures dans un incubateur ℃.Après avoir prouvé la stérilité, prélever 3 à 5 plaques et les placer à gauche, au milieu et à droite de la position de travail.Après avoir ouvert le couvercle et les avoir exposés 30 minutes, placez-les tête en bas dans un incubateur à 30 à 35°C pendant 48 heures et sortez-les.examiner.Le nombre moyen de bactéries diverses sur la plaque dans une zone propre de classe 100 ne doit pas dépasser 1 colonie, et le nombre moyen dans une salle blanche de classe 10 000 ne doit pas dépasser 3 colonies.Si la limite est dépassée, la salle stérile doit être soigneusement désinfectée jusqu'à ce que des inspections répétées répondent aux exigences.
7. Reportez-vous au chapitre (Méthode d'inspection de stérilité) dans « Méthodes d'inspection hygiénique des médicaments » et « Pratiques opérationnelles standard de Chine pour l'inspection des médicaments ».
8. Département de distribution : Département de gestion de la qualité
Conseils techniques pour salle blanche :
Après avoir obtenu un environnement stérile et du matériel stérile, nous devons maintenir un état stérile afin d'étudier un micro-organisme connu spécifique ou d'utiliser ses fonctions.Sinon, divers micro-organismes extérieurs peuvent facilement s’y mélanger. Le phénomène de mélange de micro-organismes extérieurs non pertinents est appelé bactérie contaminante en microbiologie.La prévention de la contamination est une technique essentielle dans le travail microbiologique.La stérilisation complète d'une part et la prévention de la contamination d'autre part sont deux aspects de la technique aseptique.De plus, nous devons empêcher les micro-organismes étudiés, notamment les micro-organismes pathogènes ou les micro-organismes génétiquement modifiés qui n'existent pas dans la nature, de s'échapper de nos conteneurs expérimentaux vers l'environnement extérieur.À ces fins, en microbiologie, il existe de nombreuses mesures.
La salle stérile est généralement une petite pièce spécialement aménagée dans un laboratoire de microbiologie.Peut être construit avec des tôles et du verre.La zone ne doit pas être trop grande, environ 4 à 5 mètres carrés, et la hauteur doit être d'environ 2,5 mètres.Une salle tampon doit être aménagée en dehors de la salle stérile.La porte de la salle tampon et la porte de la salle stérile ne doivent pas être orientées dans la même direction pour empêcher le flux d'air d'introduire diverses bactéries.La salle stérile et la salle tampon doivent être hermétiques.Les équipements de ventilation intérieure doivent être équipés de dispositifs de filtration de l'air.Le sol et les murs de la salle stérile doivent être lisses, difficiles à retenir et faciles à nettoyer.La surface de travail doit être de niveau.La salle stérile et la salle tampon sont équipées de lampes ultraviolettes.Les lampes ultraviolettes dans la salle stérile sont à 1 mètre de la surface de travail.Le personnel entrant dans la salle stérile doit porter des vêtements et des chapeaux stérilisés.
Actuellement, les salles stériles existent principalement dans les usines de microbiologie, tandis que les laboratoires généraux utilisent des paillasses propres.La fonction principale du banc propre est d'utiliser un dispositif à flux d'air laminaire pour éliminer diverses petites poussières, y compris les micro-organismes, sur la surface de travail.Le dispositif électrique permet à l'air de passer à travers le filtre HEPA puis d'entrer dans la surface de travail, de sorte que la surface de travail soit toujours maintenue sous le contrôle du flux d'air stérile.De plus, il y a un rideau d'air à grande vitesse sur le côté proche de l'extérieur pour empêcher l'air bactérien extérieur d'entrer.
Dans les endroits aux conditions difficiles, des boîtes stériles en bois peuvent également être utilisées à la place d’un banc propre.La boîte stérile a une structure simple et est facile à déplacer.Il y a deux trous sur le devant de la boîte, qui sont bloqués par des portes push-pull lorsqu'elles ne sont pas utilisées.Vous pouvez étendre vos bras pendant l'opération.La partie supérieure de la façade est équipée de verre pour faciliter le fonctionnement interne.Il y a une lampe ultraviolette à l'intérieur de la boîte, et les ustensiles et les bactéries peuvent être introduits par une petite porte sur le côté.
Les techniques opératoires aseptiques jouent actuellement non seulement un rôle central dans la recherche et les applications microbiologiques, mais sont également largement utilisées dans de nombreuses biotechnologies.Par exemple, la technologie transgénique, la technologie des anticorps monoclonaux, etc.
Heure de publication : 06 mars 2024